Инфекционный некроз поджелудочной железы рыб

Инфекционный некроз поджелудочной железы (ИНПЖ) - остро протекающая вирусная болезнь молоди некоторых видов лососевых рыб. Она характеризуется нарушением координации движения, потемнением кожного покрова, поражением поджелудочной железы, появлением точечных кровоизлияний на пилорических придатках, значительными изменениями в печени, селезенке и других паренхиматозных органах, а также быстрым ее развитием и высокой смертностью заболевших рыб.

Впервые ИНПЖ был зарегистрирован в форелевых хозяйствах Соединенных Штатов Америки у сеголетков палии - Salvelinus fontinalis. В дальнейшем болезнь была диагностирована и у других видов лососевых рыб, выращиваемых в североамериканских рыбозаводах и рыбопитомниках. Гораздо ранее, видимо, эту же болезнь регистрировали в Канаде как острый катаральный энтерит.

Этиология. Возбудитель болезни - фильтрующийся вирус. Относится к РНК-содержащим вирусам, имеющим гексагональную форму. Диаметр его пента- и гексагональной частицы без наружной оболочки 57-74 нм и 92 или 162 капсомера. Вирус хорошо развивается на клеточных культурах различных органов рыб и вызывает характерный цитопатический эффект. В клеточных культурах происходят дегенеративные изменения, но сами клетки при этом сохраняют вытянутую форму. Особенно легко вирус ИНПЖ размножается в перевиваемых культурах клеток RTG-2 (устойчивая клеточная культура из фибробластов), которые были получены из гонад радужной форели. Вирус хорошо растет и в культурах клеток GF, BF-2 и FHM, а также в эксплантатах яичников и плавников карповых рыб и центрархид. Особенно долго культура вируса ИНПЖ сохраняется в основной среде Игла с добавлением 5-10% телячьей сыворотки.

В культурах клеток, полученных из лягушек, зародышей морских коньков или клеток из органов теплокровных животных, вирус ИНПЖ не размножается.

Цитопатический эффект в культурах клеток, восприимчив к вирусу ИНПЖ, выявляется при температуре 26°С через 9 ч, при 20°С - через 18 ч, а при 4°С - через 12-14 сут. В отличие от возбудителя вирусной геморрагической септицемии, который вызывает цитопатический эффект лишь при рН 7,7-7,8, у вируса ИНПЖ этот эффект проявляется при рН 7,0-7,8 (оптимум 7,3-7,7). При снижении рН до 3,0-6,0 вирулентные свойства вируса исчезают.

Вирус ИНПЖ устойчив к действию эфира и хлороформа, стабилен к ультразвуковой обработке. Он выдерживает нагревание при 44°С в течение 15 мин, но относительно быстро инактивируется при нагревании до 60°С в течение 60 мин. Высушенный на воздухе вирус остается инфекционным до 2 недель (при температуре 15-22°С), в 50%-ном растворе глицерина (при 4°С) - в течение 2,5 лет, а при лиофильном высушивании и замораживании (при минус 20°С) остается активным в течение 4,5 лет.

В речной воде при 10°С вирус ИНПЖ сохраняется более 231 дня, а в иловых осадках пруда при рН 6,79 и температуре 4°С - более 210 дней. Ультрафиолетовые лучи полностью инактивируют его за 60 мин. 2%-ный раствор едкого натра и 3%-ный раствор формалина разрушают вирус за 5- 10 мин. На активность и инфекционность вируса ИНПЖ не оказывают никакого действия (даже при длительной экспозиции) метиленовый синий (20 мг/л), малахитовая зелень (10 мг/л) и сернокислая медь (100 мг/л).

Эпизоотологические данные. Болезнь регистрируют в США, Канаде, а также в некоторых странах Восточной и Западной Европы, в Японии и других регионах Восточной Азии. Кроме того, возбудитель вместе с икрой из Северной Америки завезен в Чили. В СССР ИНПЖ нет. К ИНПЖ наиболее восприимчивы гольцы, радужная форель, кумжа, некоторые другие виды лососевых рыб, выращиваемые на рыбозаводах и рыбопитомниках, в частности атлантические лососи и форель. Многие виды пресноводных рыб и некоторые морские беспозвоночные животные являются вирусоносителями. Так, вирус ИНПЖ выделяли от клинически здоровых и больных рыб (щука, плотва, окунь, миног, лещ, карп, чукучан, хариус, манхеден, усач, европейский угорь). Причем у рыб-вирусоносителей весьма высокие концентрации вируса находили во внутренних органах (желудке и кишечнике), фекалиях, сперме и овариальной жидкости. Распространение вирусоносительства в отдельных странах также может быть значительным: в некоторых прудовых хозяйствах Великобритании вирус установлен в 17% случаев.

Чаще всего ИНПЖ болеют молодь лососевых рыб (самые крупные мальки и сеголетки). Это всегда совпадает с переводом рыб на кормление комбикормами.

Сезонную закономерность ИНПЖ невозможно определить однозначно, так как в зависимости от температуры источника водоснабжения болезнь может проявляться в течение осени, зимы и весны, то есть в то время года, когда происходит выклев личинок молоди лососевых рыб и перевод их на искусственное кормление. Наиболее интенсивно ИНПЖ протекает при температуре воды 12-14°С.

Экспериментально установлено, что при температуре воды 10°C гибель мальков тем меньше, чем больше их возраст, к 20-недельному возрасту у них болезнь клинически не проявляется. Гибель рыб уменьшается при температуре воды, если она слишком низкая (до 6°С) или, наоборот, очень высокая - более 16°С. Энзоотии и эпизоотии, как правило, сопровождаются массовой гибелью больных рыб (10-90%).

Источником инфекции в природе служат больные рыбы, их выделения (экскременты и моча), рыбы-вирусоносители, трупы погибших рыб, икра от рыб-вирусоносителей. Заражение происходит через инфицированную воду и органические остатки на дне бассейнов или почву ложа неблагополучных прудов и источников водоснабжения.

В период вспышки эпизоотии огромные количества вируса рассеиваются больными рыбами или погибающими особями. В 1 см3 фекалия больной форели содержатся миллионы инфицирующих доз возбудителя, а в воде, выходящей из бассейна вместе с мелкой рыбой, выпускаемой для дальнейшего выращивания, может находиться до 25 000 инфицирующих доз в 1 л.

Во внутренних органах погибших мальков или сеголетков содержится патогенный вирус, обладающий высокой степенью вирулентности: титр вируса в таких случаях бывает равен 108-109,5 тканевых цитопатогенных инфекционных доз (ТЦИД50). Титр вируса в экскрементах, сперме и в овариальной жидкости равняется 106 ТЦИД50 на 1 мл.

Инкубационный период при ИНПЖ зависит от температуры окружающей среды и возраста рыб. Так, в экспериментальных условиях при температуре воды 12-14°С инкубационный период длится 6-10 дней. Гибель рыб в основном наблюдается в течение первых двух недель, а затем постепенно ослабевает и продолжается в течение 2-6 последующих недель. При заражении рыб путем прямого контакта больных со здоровыми инкубационный период не превышает 5-8 дней у мальков, а у сеголетков форели при температуре 12-14°С он равен 10-12 дням.

Симптомы. Болезнь протекает остро и характеризуется массовой гибелью заболевших рыб. Первым признаком неблагополучия хозяйства по ИНПЖ является внезапная гибель молоди рыб. У больных особей отмечаются судорожные подергивания тела, потеря координации движений: рыбы плавают на боку и вверх брюшком, затем совершают спиральные движения вокруг продольной оси тела, опускаются как бы в изнеможении на дно бассейна и производят слабые дыхательные движения жабрами и ртом. Затем, с развитием патологического процесса, кожный покров приобретает темную окраску, у некоторых особей развиваются одно- или двусторонняя экзофтальмия; брюшко вздувшееся, а его стенки - покрасневшие.

Многие из этих симптомов идентичны симптомам, наблюдающимся при октомитозе (гексамитозе) и алиментарном гастроэнтерите форели, но они в отличие от этих заболеваний не исчезают после применения лечебных средств и изменения диеты.

Патологоанатомические изменения. При вскрытии больных или только что погибших рыб обнаруживают точечные и петехиальные кровоизлияния на внутренних органах и главным образом на пилорических придатках. Печень и селезенка бледно окрашены - анемичны. Желчный пузырь растянут скопившейся в нем желчью. Кишечник значительно заполнен бесцветным прозрачным или молокоподобным веществом слизистой консистенции, стенки его дряблые. При гистологическом исследовании в экзокриннои и островковой частях поджелудочной железы отмечают острые некрозы, а в очагах некроза и вокруг них цитоплазматические тельца-включения. В гемопоэтической ткани почек - дегенеративные изменения и увеличение количества клеток-макрофагов. Гематокрит у больных рыб понижен до 20 (у здоровых рыб этот показатель равен 40).

Патогенез. Возбудитель проникает в организм рыб через пищеварительный тракт, а также через поврежденные ткани жабр или кожи. Затем он проникает в кровь и гематогенным путем достигает экзокринной части поджелудочной железы, вызывая острый некроз. Кроме того, вирус, наводняя организм рыб, обусловливает проявление и других патологических изменений в паренхиматозных органах и нервной ткани, в результате чего слагается весь симптомокомплекс болезни.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов гистологического исследования, при котором обнаруживают тельца-включения в поджелудочной железе.

Учитывая то обстоятельство, что в эпизоотологии и клиническом проявлении инфекционного некроза поджелудочной железы есть общие черты с симптомокомплексом некоторых инфекционных и инвазионных болезней лососевых, и в частности с вирусной геморрагической септицемией, октомитозом (гексамитозом), а также с болезнями невыясненной этиологии, наиболее достоверный диагноз на ИНПЖ ставят выделением вируса в клеточной культуре и идентификацией его в реакции нейтрализации.

В последнее время японскими и американскими учеными предложены экспресс методы диагностики ИНПЖ, а именно прямой и непрямой методы флуоресцирующих антител. Эти методы дают хорошие результаты при диагностике на ранних стадиях развития болезни. Разработан также энзиматический иммуносорбентный метод идентификации вируса инфекционного некроза поджелудочной железы, чувствительность которого составляет 105,6 ТЦД50/мл

В настоящее время предложена методика выделения от особей радужной форели возбудителя инфекционного некроза поджелудочной железы, протекающего в скрытой форме, а также от форелей-вирусоносителей, у которых вирус находится в крайне малых количествах и при обычных методах изоляции он просто теряется во время фильтрации гомогената. Суть метода состоит в том, что вместо гомогенатов тканей от подозреваемых в вирусоносительстве рыб берут клетки трипсинизированных почек, поджелудочной железы, кишечника и высевают их в сосуды вместе с клетками линии RTG-2. При наличии даже незначительных количеств вируса и вирусоносителей в индикаторных клетках RTG-2 развиваются цитопатологические изменения. Ученые, разработавшие этот метод, считают, что он почти вдвое эффективнее обычных способов.

Лечение не разработано. Economon (1963) рекомендовал в течение 2 недель добавлять в кормовые смеси больным рыбам поливинил-пирролидонйодистое соединение в дозе 0,5-1,5 г/кг массы молоди. При этом он наблюдал некоторое улучшение состояния у леченых рыб по сравнению с контролем. Некоторые исследователи рекомендуют применять антибиотики и антисептики как радикальное средство снятия пагубного воздействия бактериальной инфекции, которая часто осложняет течение основного заболевания.

Профилактика и меры борьбы основаны на тщательном и регулярном выполнении всего комплекса профилактических мероприятий, включающих в себя ветеринарно-санитарные, рыбоводно-мелиоративные и зоотехнические работы, повседневно проводимые в форелевых хозяйствах, на лососеводных рыбозаводах и рыбопитомниках.

Ветеринарно-санитарные мероприятия предусматривают предотвращение заноса возбудителей болезни с водой, орудиями лова и инвентарем, с внешне здоровыми рыбами-вирусоносителями, с сорными и дикими рыбами, с кормовыми беспозвоночными и другими гидробионтами, находящимися в неблагополучном водоеме и используемыми в качестве живого корма для молоди форели и других лососевых.

Оплодотворенную икру получают только от здоровых производителей благополучного хозяйства. Для этого накануне взятия половых продуктов рыб исследуют на наличие вируса ИНПЖ. Обычно исследуют до 10% маточного стада. Берут самца или самку (но не в период нереста), легким нажатием на боковые стенки брюшка рыбы извлекают из анального отверстия небольшую порцию экскрементов и помещают их в физиологический раствор в соотношении 1:1. Затем из этого материала готовят суспензии и исследуют в культурах клеток обычным методом. В нерестовый период для этого можно использовать собранную икру и сперму производителей.

Профилактические диагностические исследования на носительство возбудителя ИНПЖ производителями форели и других видов рыб можно проводить в течение всего года. Для этого производителям, подозреваемым в заражении ИНПЖ, в полость тела вводят физиологический раствор Хенкса или Эрла и как бы ополаскивают или омывают полость. Через некоторое время жидкость из брюшной полости отсасывают и исследуют на культурах клеток.

Эти мероприятия могут полностью предотвратить занос возбудителя болезни с икрой.

В хозяйствах, стационарно неблагополучных по инфекционному некрозу поджелудочной железы, некоторые исследователи рекомендуют проводить селекционную работу по выведению резистентных к болезни рас и породных групп хотя бы форели и рыб некоторых других видов. При этом, видимо, важное значение приобретет и отбор родительских пар по возрасту и экстерьеру. Кроме того, при селекции на устойчивость к болезни у рыб необходимо учитывать уровень наиболее важных тестов, определяющих их естественную резистентность.

Для уменьшения концентрации заразного начала в бассейнах или прудах всю больную рыбу изолируют и предотвращают контакт с благополучной по данному заболеванию рыбой. В неблагополучных прудах и бассейнах проводят все работы под руководством врача-ихтиопатолога. Погибшую рыбу вылавливают немедленно и направляют по усмотрению врача-ихтиопатолога на корм сельскохозяйственным животным, техническую или термическую обработку.

Водоподающие каналы оборудуют фильтрами и сорорыбоуловителями, препятствующими попаданию вместе с водой сорных и диких рыб, а также беспозвоночных животных как возможных переносчиков вируса ИНПЖ.

Бассейны, пруды, садки и рыбоводный инвентарь после каждого контакта с больной рыбой тщательно очищают от органических загрязнений и дезинфицируют негашеной или хлорной известью. Для обеззараживания ложа прудов применяют свежую негашеную известь по нормам не менее 60-100 ц/га. Это мероприятие проводят и с целью уничтожения возбудителей сопутствующих заразных болезней молоди лососевых рыб.

Хлорной известью дезинфицируют бетонные бассейны, лотки, помещения. В бассейнах готовят раствор хлорной извести крепостью 100-200 мг свободного хлора на 1 л воды. Стены бассейнов промывают этим раствором с помощью щеток. В раствор с хлорной известью закладывают весь деревянный инвентарь, шандоры, решетки и другие предметы, бывшие в контакте с, больной рыбой и не подвергающиеся разрушительному действию хлора. Кроме извести, для дезинфекции воды и инвентаря можно использовать перманганат калия, хлорамин, лизол, формальдегид и другие препараты, рекомендуемые в ветеринарии при вирусных инфекциях животных.

Специфических средств профилактики и борьбы с ИНПЖ пока еще нет. Многочисленные опыты по конструированию живых и инактивированных вакцин, по разработке способов их введения, проводимых в лабораторных и полупроизводственных условиях, указывают на принципиальную возможность использования вакцин для профилактики этой болезни. Однако несмотря на довольно длительный период экспериментирования (более 30 лет работают лаборатории в США, Японии и других странах по проблеме вакцинации в ихтиопатологии), еще не создано ни одной коммерческой вакцины против ИНПЖ и не проведено ни одного производственного опыта с высоким положительным эффектом. Видимо, для решения проблемы иммунопрофилактики инфекционного некроза поджелудочной железы и других вирусов болезней лососевых рыб необходимы дальнейшие всесторонние исследования по изучению биологических свойств возбудителя, его антигенной структуры и других показателей. Учитывают также биологические и биотехнологические особенности воспроизводства лососевых рыб в условиях индустриального рыбоводства.

Рыбоводно-мелиоративные и зоотехнические работы сводятся к четкому и своевременному выполнению всего комплекса мероприятий, обеспечивающих полноценное кормление рыб.

Рыбоводно-мелиоративные работы должны сочетаться с общими ветеринарно-зоогигиеническими обработками и входить в общую биотехнологию воспроизводства рыбы.

Санитарная оценка. Возбудитель инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых для человека и плотоядных животных не опасен. Рыбу из неблагополучного хозяйства, если она отвечает товарному виду и кондиции, допускают в пищу людям на общих основаниях. Больную рыбу, потерявшую товарный вид и не соответствующую товарной кондиции, по усмотрению ветеринарного врача-ихтиопатолога направляют в корм животным в проваренном виде или на техническую утилизацию. Всю погибшую рыбу подвергают термической обработке - в трупосжигательной печи.